棄去封閉液，加入適量的一抗溶液，于搖床上輕輕震蕩1h。（也可將印跡膜與一抗在2-8°C條件下孵育過夜。）將印跡膜于洗脫液中懸浮清洗5min以上，并更換洗脫液4-6次。將印跡膜與適量的HRP-結(jié)合物置于搖床上輕輕震蕩，室溫孵育1h。重復步驟3以去除未結(jié)合的HRP-結(jié)合物.將A液和B液以1：1混合即得到超敏ECL化學發(fā)光工作液，推薦使用量為0.1mL/cm2。將工作液與印跡膜于室溫孵育5min。將膜從工作液中取出，并用吸水紙吸去多余的液體，置于兩層干凈的保鮮膜之間，小心擠出印跡膜與保鮮膜之間的氣泡。將印跡膜置于暗盒中，蛋白面朝上，于暗室中進行X-光膠片曝光。建議曝光時間為60s，進而通過調(diào)整曝光時間獲得較好的實驗結(jié)果。

  化學發(fā)光試劑,增強型化學發(fā)光底物能檢測抗體以及Western blot或ELISA標簽中的HRP活性。

經(jīng)濟性與同類化學發(fā)光底物相比花費更少。pg級靈敏性,高靈敏性能快速檢測更廣泛的蛋白范圍。信號穩(wěn)定.發(fā)光時間長，能進行多次曝光.信號強.發(fā)光信號比普通的以魯米諾為基礎的HRP檢測體系強兩倍以上.工作液穩(wěn)定性高.工作液室溫穩(wěn)定存放8小時；試劑盒能在室溫下保存一年。節(jié)約抗體,需要更少（稀釋更多）的一抗和二抗.校正曲線范圍廣.校正曲線的范圍從4.00–8000pg，R2為0.992。

   化學發(fā)光試劑注意事項.勿將超敏ECL化學發(fā)光工作液暴露在陽光或強光下，否則會導致其失活。建議將工作液保存在棕色瓶中，并避免長時間暴露在陽光下，實驗室光照對工作液影響不大。使用生物素/親和素體系時，避免使用脫脂奶粉作為封閉液，因為脫脂奶粉中含有多種內(nèi)源性生物素，容易產(chǎn)生非特異性信號。使用充足的洗滌緩沖液、封閉液、抗體稀釋液和底物工作液去覆蓋印跡膜，以確保印跡膜處于濕潤狀態(tài)。使用大量的封閉液和洗滌液能減少非特異性信號的產(chǎn)生。疊氮鈉是HRP酶的抑制劑，會對反應體系產(chǎn)生干擾，因此緩沖液中應避免使用疊氮鈉做為防腐劑。印跡膜與ECL化學發(fā)光工作液孵育后5-30min內(nèi)的發(fā)出的熒光是zui強的，隨后熒光會隨著時間的延長減弱。蛋白點熒光較弱時可以適當延長曝光時間。更多相關(guān)知識,請咨詢本公司.