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化學(xué)發(fā)光試劑的發(fā)表
更新時(shí)間：2016-11-17瀏覽：1472次
化學(xué)發(fā)光試劑科學(xué)理論發(fā)展觀,核心講解.原理：辣根過氧化酶使試劑中的發(fā)光物（Luminol）氧化并發(fā)光，而試劑中含有增強(qiáng)劑這使得發(fā)光增強(qiáng)了1000倍。在免疫印跡中，將復(fù)雜的蛋白混合物經(jīng)SDS-PAGE分離，并轉(zhuǎn)移到固相膜上（如NC、PVDF）等，用于免疫學(xué)檢測(cè)，經(jīng)HRP標(biāo)記的抗體與膜上的蛋白直接（標(biāo)記一抗）或間接（標(biāo)記二抗）反應(yīng)。當(dāng)加入免疫印跡化學(xué)發(fā)光試劑后，Luminol發(fā)生氧化降解，并發(fā)射波長(zhǎng)為428nm的光，此光可經(jīng)X光膠片(放射自顯影片)感光記錄下來。
化學(xué)發(fā)光試劑使用方法,印跡膜制備,按常規(guī)方法完成SDS-PAGE和電轉(zhuǎn)膜操作，適當(dāng)?shù)姆忾]非常重要。可以通過標(biāo)記一抗或二抗的手段引入HRP，一般采用市售的HRP二抗交聯(lián)物。仔細(xì)地淋洗對(duì)于降低背景非常重要，在與HRP交聯(lián)物溫育后，膜片更需仔細(xì)洗滌，所有步驟均在室溫下完成。
化學(xué)發(fā)光試劑的配置,在使用前等量混合A液和B液，混合后盡快使用。將膜片置混合液中于室溫下振蕩溫育2分鐘，每平方厘米膜片至少使用0.1-0.2ml以覆蓋全膜片。蛋白信號(hào)顯現(xiàn),用平頭鑷鉗住膜片，垂直置于吸水紙以吸去過量試劑。置膜片于二層保鮮膜之間，小心趕盡氣泡。將膜片吸附蛋白面朝上，置于X光片盒中。于暗室中壓上X光片。根據(jù)信號(hào)的強(qiáng)弱適當(dāng)調(diào)整曝光時(shí)間，一般為1min或5min，也可選擇不同時(shí)間多次壓片，以達(dá)*效果.創(chuàng)造奇跡,更好未來.
